McFarland Standardı Neyi Gösterir?
McFarland Standardı, bakteri süspansiyonlarının yoğunluğunu optik türbidite üzerinden standardize etmek için kullanılan referans bir yöntemdir.
McFarland tüpleri belirli bir bulanıklık seviyesine sahiptir ve bu bulanıklık yaklaşık bir bakteri yoğunluğuna karşılık gelir. Ancak bu değer kesin hücre sayısını değil, yaklaşık bakteri yoğunluğunu temsil eder.
Örneğin:
|
McFarland değeri
|
Yaklaşık bakteri yoğunluğu
|
|
NO: 0.5
|
~1.5 × 10⁸ CFU/mL
|
|
NO: 1.0
|
~3 × 10⁸ CFU/mL
|
|
NO: 2.0
|
~6 × 10⁸ CFU/mL
|
|
NO: 3.0
|
~9 × 10⁸ CFU/mL
|
|
NO: 4.0
|
~1.2 × 10⁹ CFU/mL
|
Bu değerler literatürde kabul edilen ortalama değerlerdir ve kullanılan bakterinin türüne göre küçük farklılıklar gösterebilir.
Bu farkların sebebi:
-
Bakterinin hücre büyüklüğü
-
Hücre şekli
-
Işık saçılma özellikleri gibi faktörlere bağlı olarak değişebilir.
Bu nedenle McFarland standardı hücre sayımı değil, türbidite referansıdır. En yaygın kullanılan referans değeri McFarland NO: 0.5’tir.
McFarland Standardının Mikrobiyolojide Kullanımı Neden Önemlidir?
Bakteri yoğunluğunun standardizasyonu özellikle aşağıdaki testlerde kritik öneme sahiptir:
-
Antibiyotik duyarlılık testleri (Kirby–Bauer disk difüzyon)
-
Minimum inhibitör konsantrasyon (MIC) testleri
-
Mikrobiyolojik kantitatif analizler
Mikroorganizma süspansiyonunun hazırlanması ve McFarland Standardı İle Karşılaştırması Nasıl Yapılır?
1. Taze bakteri kültürü seçimi
-
18–24 saatlik saf bakteri kolonileri tercih edilmelidir.
-
Yaşlı kültürler hücre yoğunluğu ve morfolojide değişiklik oluşturabilir.
-
Koloninin kontaminasyon içermediğinden emin olunmalıdır.
2. Süspansiyon ortamının hazırlanması
Bakteriler genellikle aşağıdaki ortamlardan biri içerisinde süspanse edilir:
-
Steril fizyolojik tuzlu su
-
Fosfat tamponlu salin (PBS)
-
Steril sıvı besiyeri (broth): Tryptic Soy Broth, Nutrient Broth, Mueller Hinton Broth
Ancak bulanıklık değerlendirmesi yapılacaksa renkli veya yoğun içerikli besiyerleri tercih edilmemelidir, çünkü görsel karşılaştırmayı zorlaştırabilir.
3. Kolonilerin süspansiyona aktarılması
-
Steril bir inokülasyon öze teli, steril loop veya steril pipet ucu kullanılarak katı besiyeri üzerindeki kolonilerden bir veya birkaç koloni alınır.
-
Alınan koloniler: içinde yaklaşık 3–5 mililitre süspansiyon sıvısı bulunan steril tüpe dikkatlice aktarılır. Koloniler sıvı içerisine bırakıldıktan sonra tüp hafifçe karıştırılarak bakterilerin sıvı içerisinde dağılması sağlanır.
4. Homojen süspansiyon elde edilmesi
-
Süspansiyon vorteks ile karıştırılarak bakterilerin eşit şekilde dağılması sağlanır.
-
Topaklanmış hücreler bulanıklık değerlendirmesinde hataya neden olabilir.
5. McFarland standardı ile karşılaştırma:
Referans McFarland standardı seçilir. Örneğin No: 0.5 McFarland standardı.
Hazırlanan süspansiyon;
-
aynı ışık koşullarında
-
beyaz arka plan üzerinde veya tercihen siyah çizgili kart önünde karşılaştırılır.
Hazırlanan süspansiyon
-
Bulanıklık fazla ise → steril dilüsyon sıvısı eklenir
-
Bulanıklık düşük ise → ek bakteri koloni eklenir
Bu işlem tamamlandığında hazırlanan bakteri süspansiyonu yaklaşık olarak McFarland standardına karşılık gelen hücre yoğunluğuna ulaşmış olur.
Seri Dilüsyon ile Bakteri Yoğunluğu Hazırlama Nasıl Yapılır?
Örneğin; No: 0.5 McFarland standardı yaklaşık olarak: 1.5 × 10⁸ CFU/mL bakteri yoğunluğuna karşılık gelir. Bu süspansiyonu seri dilüsyon yöntemi ile daha düşük yoğunluklara indirilebilir.
Örnek 1:10 Dilüsyon;
Gerekli malzemeler
-
Örneğin McFarland 0,5'e ayarlanmış bakteri süspansiyonu
-
Steril fizyolojik tuzlu su veya fosfat tamponlu salin çözeltisi
-
Steril pipet veya mikropipet
-
Steril tüp
Dilüsyon işlemi
-
1 mililitre McFarland 0,5 süspansiyonu alınır.
-
Yeni bir tüpe aktarılır.
-
Üzerine 9 mililitre steril salin eklenir, karıştırılır.
Bu işlem sonrası yoğunluk:
1,5 × 10⁸ CFU/mL → (1:10 dilüsyon) → 1,5 × 10⁷ CFU/mL
Daha düşük yoğunluk istenirse, örnek seri onluk hesaplama:
|
İŞLEM
|
BAKTERİ YOĞUNLUĞU
|
|
McFarland 0,5
|
≈ 1,5 × 10⁸ CFU/mL
|
|
1 ml süspansiyon + 9 ml salin
|
≈ 1,5 × 10⁷ CFU/mL
|
|
1 ml bu dilüsyon + 9 ml salin
|
≈ 1,5 × 10⁶ CFU/mL
|
GBL® IDANTI-ROSA McFarland Seti No: 0,5–4,0
Detaylı bilgi için başlığı tıklayın
Ürün Özellikleri
-
0.5 – 4.0 arası McFarland referans değerleri
-
Stabil türbidite standardı
-
Mikrobiyolojik analizler için uygun optik referans
-
Laboratuvar kalite kontrol süreçleri ile uyumlu
Kullanım Alanları
-
Antibiyotik duyarlılık testleri
-
Bakteri süspansiyonu standardizasyonu
-
Seri dilüsyon deneyleri
-
Araştırma ve eğitim laboratuvarları
İletişim ve Teklif
Ürünlerimizle ilgili teknik dokümantasyon talepleriniz için kalite@gbl.com.tr, fiyat teklifi almak için teklif@gbl.com.tr adresleri üzerinden bizimle iletişime geçebilirsiniz.
Mikroskopi alanındaki diğer ürünlerimiz lütfen Mikroskopi GBL web sitemizi ziyaret ediniz.
Yazar: Ebubekir ERTAŞ / Biyolog
E-Mail: bekir@gbl.com.tr
Birim: Mikroskopi Ürün Grubu Sorumlusu
Tarihi: 08.03.2026