Başlık

Açıklama

REF No

5026

Kullanım Amacı

Gram (+) ve Gram (-) bakterilerin ışık mikroskopisi ile gösterilmesinde kullanılır.

İçerik Bilgi

A-Gram Kristal Moru Çözeltisi: Kristal moru, etanol, amonyum oksalat, dimetil sülfoksit.
B-Gram Lugol Çözeltisi: İyot, potasyum İyodür, %96’lık Etanol ve PVP.
C-Gram Denatüre Alkol: Etanol %96, metanol, 2-propanol ve stabilizatör.
D-Gram Safranin Çözeltisi: Safranin O, metanol, triton X-100, ve %96 etanol, sodyum azit.

Çalışma Prensibi

Gram Pozitif/Negatif durumu bakterilerin hücre duvar (peptidoglikan) yapısına bağlı bir özelliktir. Gram Negatif bakterilerin peptidoglikan yapısı dış membran ile iç membran arasında Gram Pozitif bakterilere göre daha ince şekildedir. Bu boyamayı yaparken bir takım uygulamalar vardır. Bunlar sırasıyla primer boyama, mordant uygulaması, seçici uygulama, zıt boyamadır.Primer boyama, kristal viyole ile gerçekleştirilmektedir. Kristal Viyole boyama yöntemlerinde kullanılan bir bazik boyadır. Teknikte hücresel kısımların boyanmasında kullanılır. Bu uygulama tek başına uygulanırsa bütün bakteriler mor renkli gözükür. Mordant uygulaması ise boyanın hücreye girip, peptidoglikan tabakasına bağlanmasını sağlamaktır.Bu uygulamada renk sabitleştirici ajan olarak İyot çözeltisi kullanılır. Bu uygulamadan sonra seçici uygulama yöntemi uygulanır. Bu uygulama da preperat %96’lık alkol kullanılarak muamele edilir ve Gram Negatif bakterilerin dış zarı zayıflatılır ve boyanın uzaklaştırılması sağlanır. Bu uygulama sonunda Gram Pozitifler mor, Gram Negatifler ise renksizdir. Zıt boyama yöntemi son uygulamadır. Safranin ile gerçekleştirilen bu uygulama Gram Negatif bakterileri boyayarak, pembe renkli görünmeleri sağlanır. Bu uygulama sonunda Gram Pozitif bakteriler hala mor renklidir.

Uyarılar, Önlemler, Alınacak Tedbirler

Çok alevlenir sıvı ve buhar. Ciddi göz tahrişine yol açar. Kansere yol açma şüphesi var. Isıdan/ kıvılcımdan/ alevden/ sıcak yüzeylerden uzak tutun. Koruyu eldiven/ koruyucu kıyafet/ göz koruyucu/ yüz koruyucu kullanın. Deri ile temas halinde: Kirlenmiş tüm giysilerinizi hemen kaldırın/çıkartın. Cildinizi su/ duş ile kurulayın. Göz ile teması halinde: Su ile birkaç dakika dikkatlice kurulayın. Takılı ve yapması kolaysa, kontak lensleri çıkartın. Durulamaya devam edin. Maruz kalınma veya etkileşme halinde İSE: Tıbbi yardım/bakım alın. Kilit altında saklayın.

Uygulama Şekli

1. Preparatı “A-Gram Kristal Moru Çözeltisi” ile örtün. 5 dakika sonra silkeleyerek dökün.
2. Hassas bir şekilde distile suyla yıkanır.
3. Preparatı “B-Gram Lugol Çözeltisi” ile örtün. 1 dakika sonra silkeleyerek dökün.
4. Hassas bir şekilde distile suyla yıkanır.
5. Preparatı “C-Gram Denatüre Alkol Çözeltisi” ile örtün 5-15 saniye sonra lamı silkeleyerek ayıracı uzaklaştırın.
6. Hassas bir şekilde distile suyla yıkanır.
7. Preparatı “D- Gram Safranin Çözeltisi” ile örtün. 1 dakika sonra lamı silkeleyerek ayıracı uzaklaştırın.
8. Hassas bir şekilde distile suyla yıkanır.
9. Havada tercihen ısıtıcılı tabla üzerinde kurutun. Mikroskopta inceleyin.

Teorik Sonuçlar

Gram pozitif bakteriler	Mor
Gram negatif bakteriler	Pembe

Raf Ömrü

2 yıl.

Depolama Sıcaklığı

15-25°C

pH(25°C'de)

A-Gram Kristal Moru Çözeltisi: 5,0±0,3
B-Gram Lugol Çözeltisi: 5,0±0,3
C-Gram Denatüre Alkol: Uygun veri yoktur.
D-Gram Safranin Çözeltisi: 6,8±0,2

Taşımacılık Bilgileri

Kristal Moru Çözeltisi
Karayoluyla taşıma/sevkiyat (ADR/RID) – UN1993, Etanol, 3, II
Deniz yoluyla taşıma/sevkiyat (IMDG) – UN1993, Etanol, 3, II
Hava yoluyla taşıma/sevkiyat (ICAO/IATA) – UN1993, Etanol, 3, II
Gram Denatüre Alkol
Karayoluyla taşıma/sevkiyat (ADR/RID) – UN1987, (Etanol, Metanol, İzopropil alkol) 3, II
Deniz yoluyla taşıma/sevkiyat (IMDG) – UN1987, (Etanol, Metanol, İzopropil alkol) 3, II
Hava yoluyla taşıma/sevkiyat (ICAO/IATA) – UN1987, (Etanol, Metanol, İzopropil alkol) 3, II
Gram Safranin Çözeltisi
Karayoluyla taşıma/sevkiyat (ADR/RID) – UN1992, (Etanol, Metanol) 3, II
Deniz yoluyla taşıma/sevkiyat (IMDG) – UN1992, (Etanol, Metanol) 3, II
Hava yoluyla taşıma/sevkiyat (ICAO/IATA) – UN1992, (Etanol, Metanol) 3, II

Sipariş ve Ambalaj Bilgileri

Sipariş No	Birim	Hacim	Ambalaj Şekli	Kutu İçi Miktar	Koli İçi Miktar
445026050050	Adet	50 mL	50 ml, HDPE Damlalıklı Beyaz Şişe	1 set	20 set
445026050250	Adet	250 mL	250 ml, PP Damlalıklı Beyaz Şişe	1 set	15 set
445026020500	Adet	500 mL	500 ml, HDPE Beyaz Şişe 28 mm	1 set	6 set

Anahtar Kelimeler

Gram-negative bacteria, Gram-positive bacteria, differentiation of bacteria, identification of bacterial isolates, staining technique in microbiology, Gram’s crystal violet Solution, Gram’s iodine Solution, Gram’s Decolorizer Solution, Gram’s safranin Solution, Gram staining, Gram's method